Морфологические методы doc


Фиксирующие средства Простые фиксаторы



страница5/30
Дата14.03.2019
Размер4.42 Mb.
#75249
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   30

Фиксирующие средства Простые фиксаторы


Формалин – наиболее распространенная и универсальная фиксирующая жидкость с характерным резким запахом. Продаж- ный формалин представляет собой 35-40% водный раствор фор- мальдегида. По техническим условиям он постоянно содержит примесь метилового спирта (до 15%), муравьиную кислоту, а иногда ацетон и другие. Для фиксации кусочков применяют 10- 15% раствор формалина на водопроводной воде. Формалин обла- дает высокой проникающей способностью в ткани, поэтому при- меняется и для фиксации крупных объектов.

Этиловый спирт. Для фиксации кусочков ткани и органов применяют как абсолютный, так и 96 спирт. Абсолютный спирт как фиксатор имеет преимущества перед 96 спиртом, так как вследствие выраженного коагулирующего действия он меньше деформирует клеточные структуры. Есть разные мнения по пово- ду крепости этилового спирта как фиксатора. В сравнении с фор- малином спирт обладает меньшей проникающей способностью, поэтому в нем фиксируют кусочки толщиной 0,3-0,5 см. Что ка- сается мозговой ткани, то во избежание механического повреж- дения вырезаются пластинки толщиной до 0,6 см. Длительность фиксации – от нескольких часов до суток в зависимости от харак- тера ткани и толщины кусочка.

Сулема – применяется в качестве насыщенного раствора на дистиллированной воде и на 0,9% растворе поваренной соли. На- сыщенный раствор готовится из расчета 10 г сулемы на 100 мл дистиллированной воды и физиологического раствора. Нагрева- ют раствор до кипения, затем охлаждают и фильтруют. Для фик- сации берут кусочки не толще 0,3 см и фиксируют в течение 10- 12 часов, после чего идет промывка в проточной воде в течение 24-48 часов. Сулема является сильным ядом, поэтому требуется большая осторожность при работе с ней.


Фиксирующие смеси


Из числа сложных фиксирующих жидкостей наибольшее практическое значение имеют: мюллеровская жидкость, ценкер- формол, жидкости Орта, Рего, Карнуа, Буэна и спирт с формали- ном.

Мюллеровская жидкость: двухромовокислый калий………………2,5 г сернокислый натрий…………………..1 г дистиллированная вода……………….100 мл

Растворяют в колбе при нагревании, получается прозрачный оранжевый раствор. Фиксация небольших кусочков (до 0,5 см) при комнатной температуре длится 1,5-2 месяца, а при темпера- туре 37 С – 1-2 недели.



Ценкер-формол. Важнейшая сложная жидкость, которая представляет собой 5% раствор сулемы на мюллеровской жидко- сти в смеси с формалином. Последний добавляют из расчета 5 мл (по Хелли) или 10 мл (по Максимову) на каждые 90-95 мл рас- твора. В оригинальной ценкеровской жидкости вместо формали- на берется крепкая уксусная кислота, которая добавляется перед употреблением из расчета 5 частей кислоты на 95 частей 5% рас- твора сулемы на мюллеровской жидкости. Время фиксации – 12- 24 часа, затем – промывание в воде в течение 24-48 часов.

Жидкость Орта представляет собой 10% раствор формалина на мюллеровской смеси. Фиксация длится 24-48 часов, дальше идет промывка в проточной воде в течение 24-48 часов.

Жидкость Рего1:


двухромовокислый калий……………..2,5 мг формалин чистый (неразведенный)…..20 мл вода водопроводная……………………80 мл

Фиксируют объекты 24-48 часов и затем промывают в про- точной воде (24-48 часов).


Жидкость Карнуа:


спирт абсолютный……………………..60 м хлороформ………………………………30 мл уксусная ледяная кислота……………...10 мл

Данная фиксирующая смесь рекомендуется для фиксирования жировой ткани методом контролируемо- го хромирования, когда изучаемую ткань необходимо залить в парафин.

Кусочки толщиной от 2 до 4 мм фиксируют в приготовлен- ной жидкости от 2 до 3-4 часов. Нельзя задерживать объекты в ней больше, чем это необходимо для их полной фиксации. После этого переносят в чистый спирт (абсолютный или 96) и затем за- ливают.



Смесь спирта с формалином. Для фиксации употребляется 5-10% раствор формалина на спирте различной крепости. Время фиксации – 24-48 часов.

Жидкость Буэна:


насыщенный водный раствор пикриновой кислоты…75 мл формалин (неразведенный)…………………………….25 мл ледяная уксусная кислота……………………………….5 мл Жидкость готовится перед использованием. Продолжитель-

ность фиксации – от 1-2 до 12-24 часов, смотря по величине объ- ектов; можно задерживать объекты в жидкости и на несколько дней.



Обработка материала


Обезвоживание материала проводят в чисто вымытых и высушенных банках с притертыми пробками, лучше всего емко- стью 100 мл. В эти банки наливают спирты определенной крепо- сти с таким расчетом, чтобы уровень их был выше объекта, по крайней мере, на 1-2 см. Если притертость пробки недостаточная, то их надо обязательно притереть с наждачным порошком.

Большое значение для получения хороших микроскопиче- ских препаратов имеет постепенность обезвоживания. Чем неж- нее объект и чем больше опасность его сжатия и сморщивания, тем равномернее необходимо повышать крепость спирта.

Нельзя сразу после промывания помещать материал в 96 спирт. Лучше всего приготовить по указанной схеме или форму- ле ряд спиртов: 50, 60, 70, 80, 90, 96, абсолютный-1 и абсолют-

ный-21 (табл. 1).


Абсолютный спирт готовится на субстратах, отнимающих воду, таких как медный купорос, силикагель и др. Для обезвоживания 100 мл спирта необходимо 10 г обезвоженного медного купороса. В течение 1-2

дней банку встряхивают. Купорос приобретает голубой цвет, тогда реактив меняют на новый и так про- должают до момента, когда купорос перестанет менять цвет.




Таблица 1. Приготовление спиртов различной концентрации


из 96о спирта

Для по- лучения 100 мл спирта

Объем составных частей

960

спирта


Н2О

900

спирта


Н2О

800

спирта


Н2О

700

спирта


Н2О

400

42

58

44

56

50

50

57

43

450

47

53

50

50

56

44

64

36

500

52

48

56

44

63

37

71

29

600

63

37

67

33

75

25

86

14

700

73

27

78

22

88

12

-

-

800

83

17

89

11

-

-

-

-

900

94

6

-

-

-

-

-

-

На практике можно пользоваться упрощенным расчетом: брать количество спирта в миллилитрах, равное крепости тре- буемого рабочего спирта, и к нему доливать столько воды, чтобы их сумма соответствовала цифре крепости исходного спирта. На- пример, исходный спирт – 96о. Для получения 60о спирта следует

к 60 мл исходного спирта долить 36 мл воды.

При сулемовых фиксаторах для удаления из фиксированного материала сулемы в 70 спирт следует прибавить йодной настой- ки до цвета крепкого чая. Материал небольшими кусочками тол- щиной от 1-1,5 мм до 1-2 см последовательно переносят из спир- та в спирт.

Время пребывания материала в спиртах различно для разных тканей; оно зависит также от размеров объекта и может исчис- ляться от 25-30 минут для очень маленьких объектов до 2-3 суток для объектов толщиной 2 см. Поскольку полное обезвоживание – важнейшее условие успешной заливки, то материал, как правило, выдерживают в каждом спирте не менее 24 часов. При перекла- дывании материала из слабого в спирт более высокой концентра- ции кусочки надо тщательно осушить фильтровальной бумагой. Это предотвращает быстрое снижение крепости каждого после- дующего спирта. Спирты не следует слишком долго повторно употреблять, так как они загрязняются веществами, извлекаемы- ми из материала, особенно жиром. Спирты не должны быть мут- ными. Для проверки степени насыщенности спиртов жирами

нужно смешать небольшое количество спирта из батареи с водой, если появится белая густая муть (эмульсия), данный спирт необ- ходимо заменить новым.






Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   30




База данных защищена авторским правом ©www.vossta.ru 2022
обратиться к администрации

    Главная страница