Морфологические методы doc


Заливка материала в желатин



страница7/30
Дата14.03.2019
Размер4.42 Mb.
#75249
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   30

Заливка материала в желатин


Обычно при этом методе пользуются формалиновой фикса- цией, но возможно применение и других фиксаторов. Фиксатор предварительно тщательно отмывают. Белый первосортный же- латин растворяют в 1% тимоловой воде, в которой его сначала в течение 20 мин. размачивают, а затем нагревают на водяной бане до температуры 37С. Таким образом приготовляют 12% и 24%

растворы желатина1. Растворы желательно готовить по мере не-



Готовят глицерин-желатин из чистого пищевого желатина: 5 г желатина заливают 30 мл дистиллиро- ванной воды и оставляют набухать на 2-3 ч. Затем добавляют 30-35 г глицерина и 0,5 г кристаллической

обходимости и хранить в застывшем виде в холодном месте. Ти- моловую воду получают путем растворения тимола в дистилли- рованной воде при температуре 50С с последующим фильтрова- нием. Хорошо промытые кусочки помещают в 12% раствор желати- на на 3-6 часов, а затем – в 24% раствор желатина на 6-12-24 ч. Про- питывание идет при температуре 37С в баночке с притертыми пробками во избежание испарения воды и сгущения желатина. После пропитывания в 24% растворе желатина материал залива- ют желатином и охлаждают в холодной воде (как и при заливке в парафин), но с соблюдением еще больших предосторожностей во избежание смешивания желатина с водой. Из затвердевшего же- латина вырезают блоки и фиксируют в 20% растворе формалина в течение 3-6 часов. Блоки сохраняют в 10% растворе формалина. Перед резкой на замораживающем микротоме отмывают форма- лин в проточной воде в течение 10-15 минут.

Необходимо иметь в виду, что желатин сильно прокрашива- ется, поэтому перед окрашиванием можно удалить его из срезов. Полностью удалить желатин можно только из срезов, сделанных на формалинизированных блоках. Однако такие блоки слишком мягки, и резка, а также окраска срезов затруднены для удаления желатина; срезы из формалинизированных блоков помещают в 10% водный раствор KOH или NaOH на 30 минут в термостате при 37С и промывают водопроводной водой.

Приготовление парафиновых срезов


К установленному ножу осторожно подводят объектодержа- тель блоком, придвигая к нему одновременно и нож. Подачу объ- ектодержателя осуществляют либо при помощи кремальеры, ли- бо рукой, либо используя микровинт. Как только нож и блок бу- дут сближены до соприкосновения, проверяют еще раз горизон- тальное положение верхней поверхности блока; если нужно, под- правляют и приступают к выравниванию его поверхности путем срезания толстых срезов, пользуясь пяткой ножа, местом, бли- жайшим к рукоятке. Несмотря на такую грубую резку, подачу
карболовой кислоты, растворяют и, постепенно перемешивая, нагревают на водяной бане. Так как при сильном и продолжительном нагревании желатин теряет способность затвердевать после охлаждения, то приготовленную смесь доводить до кипения не следует. Если есть возможность, то после нагревания смесь профильтровывают в горячем виде через влажную стеклянную вату. Для заключения смесь должна быть нагрета до 30 – 35 С.

объекта в тот момент следует вести только при помощи микро- винта.

После того как поверхность блоков будет выровнена и обна- жится ткань кусочка, переходят к получению срезов желаемой тол- щины, что определяется соответствующей установкой микрометри- ческого винта. Полученные срезы аккуратно при помощи мягкой кисточки и препаровальной иглы снимают с бритвы, не касаясь ее лезвия и переносят в большую чашку с дистиллированной водой (но не горячей, так как парафин может расплавиться).

Удобно переносить срезы на воду лабораторным [20] и Т- образным зажимом [21], подхватывая серию срезов с ножа первым зажимом поперек, а вторым – за свисающий конец серии, и перено- сят на воду. Для наклеивания расплавленный срез вылавливают из воды на заранее приготовленное предметное стекло; для этого стек- ло одним концом опускают в чашку с водой, подводят под срез и подхватывают его, удерживая препаровальной иглой на средней

части стекла. Так как парафино- вые срезы при наклеивании вби- рают воду, то во избежание ар- тефактов при дальнейшей обра- ботке необходимо их тщательно просушить в термостате при тем- пературе 37-40С от 2 до 24 ч.

Вопросы для самоконтроля



  1. Назовите правила взятия материала.

  2. Перечислите фиксирующие средства.

  3. Как производят обезвоживание материала?

  4. Как приготовить 1000 спирт?

  5. В какие среды производят заливку материала?



    1. РЕЗКА МАТЕРИАЛА


Микротомные ножи. Для получения гистологических срезов применяют специальные микротомные ножи, различающиеся по форме, длине и углу сечения лезвия. По форме они представляют собой сложный стальной клин, у которого режущий край имеет

дополнительную клиновидную заточку. Длина ножа может составлять от 8 до 50 см.

По конфигурации лезвия различают три группы микротомных ножей: А, В и С. У микротомных ножей, относящихся к группе А, одна поверхность ровная, а дру- гая вогнутая (их называют плоско-вогну- тыми с большой кривизной вогнутой по- верхности). Эти ножи чаще всего изготов- лены из мягкой или относительно мягкой стали и предназначены для резки объектов, залитых в целлоидин.

Ножи, относящиеся к группе В, назы- ваются плоско-вогнутыми, но кривизна вогнутой поверхности у них значительно меньше, чем у ножей группы А. Они изго- товлены из более твердой стали, использу- ют их для приготовления целлоидиновых и целлоидин-парафиновых срезов.

У ножей, относящихся к группе С, обе поверхности клин- ка плоские. Их изготавливают из твердой стали и применяют для резки объектов, залитых в парафин, а также для получения срезов на замораживающем микротоме.

Кроме того, для приготовления парафиновых и полутонких срезов на микротомах и ультратомах используют металлические магнитные лезвия и стеклянные ножи. Металлическое магнит- ное лезвие (одноразовый нож) позволяет получить срезы с 50-60 парафиновых блоков, затем лезвие меняют.






Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   30




База данных защищена авторским правом ©www.vossta.ru 2022
обратиться к администрации

    Главная страница