Морфологические методы doc


Микротомы и особенности работы на них



страница9/30
Дата14.03.2019
Размер4.42 Mb.
#75249
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   30

Микротомы и особенности работы на них


Микротомы - это приборы, с помощью которых получают срезы тканей, залитых в различные среды, а также замороженных и нефиксированных. Микротомы позволяют получать гистологи- ческие срезы различной толщины. По принципу действия разли- чают санные, ротационные, замораживающие микротомы, а также криостаты и вибратомы.

Санные микротомы характеризуются горизонтальным движением ножа и вертикальным подъемом блокодержателя. Их с успехом используют для резки объектов, залитых в целлоидин, цел- лоидин-парафин и парафин. Основные части микротома располага- ются на специальных салазках, отсюда происходит его название. Принцип работы санного микротома заключается в том, что при об- ратном ходе ножа ножевые салазки толкают стержень со шкалой ре- гулятора подачи, вызывая его перемещение. Движение стержня пе- редается на тягу, которая с помощью «собачки» поворачивает хра- повик. Вращение храповика передается микровинту, который с по- мощью разъемной гайки перемещает салазки с блоком вверх. С ка- ждым срезом блок поднимается все выше на расстояние, соответст- вующее толщине среза. После того как блокодержатель достигнет высшей точки, с помощью разъемной гайки надо опустить салазки с механизмом в крайнее нижнее положение.

Существуют другие разновидности санных микротомов с раз- личными вариантами способов подачи, зажимов для ножей и т.д.



Ротационные микротомы предназначены для резки пара- финовых блоков, с их помощью можно получать серийные срезы. Важнейшая часть ротационного микротома - механизм микропо- дачи, который включает в себя храповик, дифференциальный ме- ханизм, микровинт, лимб, косозубую передачу и кулачок. При- водной механизм при повороте вала с помощью «собачки» пово- рачивает на заданное количество зубьев храповик, на оси которо- го находится зубчатое колесо, передающее через шестерню вра- щение микровинту. Винт перемещает каретку подачи объекто- держателя. Толщина срезов устанавливается поворотом лимба.

Объектодержатель ротационного микротома - винтовой за- жим, вмонтированный в шаровую оправу каретки подачи. Шар- нирный механизм позволяет подать блок под любым углом. Объ- ектодержатель фиксируется в зажиме специальной рукояткой.

Держатель для ножа - массивная подставка с двумя верти- кальными стойками, в которые вмонтированы двигающиеся дер- жатели, приспособленные для установки ножа под нужным уг- лом. Фиксация ножа осуществляется винтами. В переднезаднем направлении нож перемещается по специальным направляющим с помощью винта. Постепенно приближая нож к объекту и одно- временно поворачивая колесо подачи, подравнивают площадь ре- зания, а затем нож фиксируют.

Ротационные микротомы снабжены специальной транс- портной лентой, на которую с ножа попадает полоска (серия) сре- зов. На ленте их разделяют препаровальными иглами и произво- дят дальнейшие манипуляции. Снимать срезы с ножа ротацион- ного микротома можно кисточкой или препаровальной иглой.



Замораживающие микротомы используют для резки не залитых, но фиксированных объектов, материала, залитого в же- латин, и водорастворимых пластмасс. Особенно широко приме- няются замораживающие микротомы для изготовления препара- тов при исследовании материала срочных биопсий. По своей кон- струкции замораживающие микротомы относятся к микротомам санного типа, но в их устройстве есть некоторые особенности. Станина имеет приспособление для крепления к столу. Нож уста- навливают под нужным углом в подвижной ручке с помощью од- ного или двух зажимов. Автоматическая подача осуществляется при каждом размахе ручки с ножом через систему рычагов. Замо- раживающий столик снабжен приспособлением для подачи уг- лекислоты или охлаждается термоэлектрически с помощью полупроводниковых элементов.

Криостаты, вибратомы


С развитием гистохимии ферментов и иммуноморфологии возникла необходимость в обработке нефиксированного мате- риала, которая была реализована с помощью специальных при- боров - криостатов. Позднее появились криокиты и вибратомы.

Криостат - специализированная холодильная камера с уста- новленным в ней микротомом, в которой имеются отверстия для рук, люминесцентная лампа и смотровое стекло. Надежная изо- ляция позволяет поддерживать в криостате температуру от -5 до - 25 °С. Отрицательными моментами при работе с криостатом яв- ляются: значительное переохлаждение рук оператора, недоста- точная освещенность рабочего поля, а также невозможность ори- ентировать объект относительно кромки ножа. Эти недостатки практически устранены в криокитах зарубежного производства, управление которыми вынесено за пределы морозильной камеры. В них можно отдельно регулировать температуру объекта и ножа. Через 3-5 мин. после включения прибора достигается низкая тем- пература, причем охлаждение возможно до -65 °С, что предот- вращает образование кристаллов в тканях.

Резание парафиновых блоков на санном микротоме


Парафиновый блок, наклеенный на деревянную колодку или без нее (с большим слоем парафина), зажимают в объектодержа- тель. Установив нужный угол наклона ножа (оптимальный 13- 15°) в зависимости от плотности ткани, медленно подводят нож к блоку, регулируют его высоту до соприкосновения с ножом. Сна- чала выравнивают поверхность блока, установив микрометриче- скую шкалу на получение толстых (20-25 мкм) срезов, затем шкалу переводят на 6 - 8 мкм и приступают к резанию материала. Как правило, нож располагается перпендикулярно, но возможно также получение срезов (особенно с более плотных объектов) ножом, который установлен под углом к станине микротома.

Срезы с блока осторожно снимают с помощью сухой или смоченной в спирте кисточки, используют также изогнутую пре- паровальную иглу или скальпель. Срезы обычно переносят в ко- робку, дно которой выстлано бумагой черного цвета, и уклады- вают матовой стороной вверх. После получения нужного количе- ства срезов рядом с ними кладут блок или этикетку с номером. Удобнее сразу обработать 20-30 срезов, а затем приступить к монтированию их на предметные стекла.

Часто срезы наклеивают на предметное стекло непосредст- венно с ножа. Для этого их переносят в склянку с теплой (35- 40 °С) дистиллированной или кипяченой водой, а затем вылавли-

вают на предметные стекла, которые предварительно обезжири- вают и натирают белком с глицерином. Срезы приклеивают на предметное стекло блестящей, обращенной к ножу стороной. Не- большие складочки на срезе можно расправить, осторожно дот- рагиваясь до них углом согнутой препаровальной иглы.

Можно расправлять срезы непосредственно на стекле с по- мощью специального приспособления для сушки и расправления парафиновых срезов. Для этого на предметное стекло пипеткой наносят каплю воды и в нее опускают срез. Стекло со срезом по- мещают на нагреваемый столик прибора, где срез постепенно расправляется. После удаления избытка воды пипеткой или фильтровальной бумагой стекло со срезом подсушивают, и одно- временно срез плотно фиксируется на предметном стекле. На на- греваемом столике прибора помещается одновременно 45 пред- метных стекол, при его использовании не требуется дальнейшего просушивания стекол со срезами в термостате. Имеются специ- альные импортные ванночки для расправления срезов и пе- реноса их на стекло. В них постоянно поддерживается опти- мальная температура воды 38 °С.

Продолжительность просушивания срезов в термостате при 37 °С – 6-12 ч. В случае необходимости проведения срочной окраски срезы можно поместить на 10-15 мин. в термостат при 56 °С до начала плавления парафина, что способствует лучшей фиксации среза на предметном стекле. Однако при этом несколько затрудня- ется депарафинирование: требуется применение дополнительной порции ксилола и увеличение продолжительности депарафинирова- ния.

Существует сухой способ приклеивания срезов к стеклу, ко- торый пригоден только для срезов отличного качества. На пред- метное стекло, смазанное тонким слоем белка с глицерином, по- мещают срез, аккуратно расправляют его препаровальной иглой или скальпелем и слегка подогревают на спиртовке или нагре- ваемом столике.




Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   ...   30




База данных защищена авторским правом ©www.vossta.ru 2022
обратиться к администрации

    Главная страница