Сравнительная характеристика клеточного состава регионарных лимфатических узлов печени при экспериментальном гепатите в условиях его коррекции масляным экстрактом корня лопуха

Казахстанско- Российский медицинский университет, г. Алматы.

КазНМУ им. С.Д.Асфендиярова, г. Алматы.

Наиболее актуальной остается проблема токсических поражений печени обусловленных применением лекарственных средств. При этом особую значимость приобретает лимфатическая систе­ма, выполняющая дренажно-детоксикационную функцию [1,2].

Среди средств, применяемых для коррекции нарушенных функции наибольшее внимания заслуживают препараты растительного происхождения. Они обладают низкой токсичностью, высокой биологической доступностью, и оказывают корригирующее действие на обменные процессы, нарушенные функции иммунной системы [3,4].

Перспективным представляется использование масляных фитоэкстрактов, легко проникающих через мембраны клеток, не обладающих раздражающими свойствами и более устойчивыми по сравнению с водными извлечениями. Масляные фитоэкстракты имеют достаточный дозовый интервал, собственную асептичность и антиоксидантность [5,6].

В эксперименте использовали 180 белых крыс массой 180-200 г. Экспериментальные животные были разделены на 3 группы: I группа- интактные животные – 40 крыс, II группа - животные с токсическим гепатитом - 60, III - группа животные с токсическим гепатитом и коррекцией масляным экстрактом корня лопуха – 80.

Во 2-й группе животных была создана модель экспериментального токсического гепатита [Н.П.Скакун, А.Н.Олейник, 1967] путем одноразового внутрижелудочного введения через зонд циклофосфана из расчета 100 мг/кг массы тела [7]. III группе животных после создания модели токсического гепатита вводили масляный экстракт корня лопуха - 2,5 мл/кг массы тела внутрижелудочно ежедневно в течение 30 дней.

Животных выводили из эксперимента через 7, 14, 21, 30 сутки от начала эксперимента путем декапитации.

Лимфатические узлы фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина в течение 24-48 часов. Затем материал проводился через спирты возрастающей крепости и заливался в парафин. Серийные срезы, толщиной 5-7 мкм, производились на санном микротоме. В соответствие с поставленными задачами срезы подвергали гистологическому методу исследования по прописям, изложенным в классических руководствах по гистологической технике [8]. Срезы окрашивали: гематоксилином и эозином - для изучения микроанатомической организации органов, а также определения объемных долей основных структур; азур-II-эозином и гематоксилином - эозином для идентификации различных видов клеток; по методу ван-Гизона - для выявления соединительной ткани.

Морфометрические исследования включали в себя установление морфологических параметров микроанатомической организации и содержания клеток по различным зонам лимфатических узлов, что позволило определить морфологические изменения лимфатических узлов при токсическом гепатите в условиях коррекции масляным экстрактом корня лопуха.

Подсчет клеточных элементов проводили по функциональным зонам лимфатических узлов: в корковом плато, в лимфоидных узелках со светлыми центрами и без светлых центров, паракортикальной зоне, мякотных тяжах [9].

Полученные количественные величины обрабатывали методом вариационной статистики, по критерию Стьюдента определялись вероятность достоверных различий.

В корковом плато выраженные изменения клеток выявлены к концу эксперимента. Количество малых лимфоцитов и митотически делящихся клеток значительно и достоверно уменьшалось в течение всего эксперимента: в большей мере это было выражено на 30 сутки в 1,28 раза и 6 раз соответственно. Численность средних лимфоцитов и макрофагов увеличивалась во всех сроках эксперимента, причем в большей степени на 21 сутки в 2,24 раза и 2 раза соответственно. Количество дегенерирующих клеток нарастало в течение всего эксперимента и концу достигало своего максимального значения в 29 раз.

В паракортикальной зоне общая клеточная плотность уменьшалась на всех сроках эксперимента. При этом основным клеточным элементом, показатель которого снижался, были бласты. Количество малых лимфоцитов и бластов снижалось на всех сроках в большей степени на 30 сутки в 1,29 раз и в 2,25 раза соответственно. Численность макрофагов и дегенерирующих клеток при циклофосфановым гепатите значительно возрастала на всех сроках и достигала своего максимального значения на 30 сутки в 4,2 раза. Количество ретикулярных клеток нарастало в течение всего эксперимента и достигало своего максимального значения на 21 сутки в 2 раза относительно уровня контрольного значения.

В лимфоидном узелке без светлого центра общая плотность клеточных элементов снижалась с 14 суток за счет малых лимфоцитов и ретикулярных клеток. Количество средних лимфоцитов, макрофагов и дегенерирующих клеток увеличивалось в большей степени на 21 сутки (превышая контрольный уровень в 1,53 раза, 4,24 раза, 7 раз).

В лимфоидном узелке со светлым центром при циклофосфановым гепатите на 21 сутки численность бластов в 1,68 раз, митотически делящихся клеток 1,44 раза, макрофагов в 10,6 раз, дегенерирующих клеток 6,4 раза превышала контрольные значения.

В мякотных тяжах нами было выявлено значительное снижение общей клеточной плотности на всех сроках эксперимента, но в большей мере это обнаруживалось на 14 сутки в 1,72 раза ниже уровня контроля. Количество малых лимфоцитов, средних лимфоцитов, плазмоцитов значительно снижалось 1,41 раз, 2,23 раза и 2,13 раза соответственно. Количество макрофагов и дегенерирующих клеток возрастало на протяжении всего опыта, достигая своих максимальных значении на 30 сутки в 2 раза и 36 раз.

Введение масляного экстракта корня лопуха вызвало значительные изменения цитологического профиля во всех исследуемых структурно-функциональных зонах регионарных лимфатических узлов печени.

Клеточный состав в группе с циклофосфановым гепатитом, получившей масляный экстракт корня лопуха, по сравнению с контролем и с группой с циклофосфановым гепатитом представлен следующим образом.

В корковом плато общая клеточная плотность повышалась, не отличаясь от контроля на 30 сутки, превышая во все сроки таковые показатели в группе с циклофосфановым гепатитом. Количество малых лимфоцитов повышалось и к 30 суткам не имело достоверных различий с контролем. Численность бластов была выше таковых в группе с циклофосфановым гепатитом во все изученные сроки. Количество макрофагов и дегенерирующих клеток в условиях коррекции масляным экстрактом корня лопуха снижалось во все сроки эксперимента и достигало контрольных величин.

В условиях коррекции масляным экстрактом корня лопуха в паракортикальной зоне общая клеточная плотность повышалась, и к концу эксперимента этот показатель был выше контроля в 1,24 раза, и выше такового в группе с циклофосфановым гепатитом. Если количество митотически делящихся клеток на 21 сутки эксперимента снижалось, то на 31 сутки этот показатель был выше исходного уровня в 34 раза, группы с циклофосфановым гепатитом в 103 раза. Численность малых лимфоцитов достоверно увеличивалась и к концу эксперимента достигала контрольных величин, а показатель группы с токсическим гепатитом превышала в 1,25 раза.

В лимфоидном узелке без светлого центра численность малых лимфоцитов при введении масляного экстракта корня лопуха возрастала в течение всего эксперимента и на 30 стуки достигала контрольных значений. К концу эксперимента количество макрофагов и дегенерирующих клеток определялись в пределах нормы, в отличие от таковых в группе с циклофосфановым гепатитом.

В лимфоидном узелке со светлым центром в корригируемой группе клетки лимфоидного ряда на 30 сутки определялись в пределах нормы.

В мякотных тяжах лимфатических узлов животных, получавших масляный экстракт корня лопуха уже на 14 сутки количество плазмоцитов возрастало в 2,32 раза выше таковых в группе с токсическим гепатитом и на 21 сутки наблюдалась выраженная плазматизация.

Заключение. Таким образом, внутрижелудочное введение циклофосфана в дозе 100 мг/кг массы тела приводило к структурным преобразованиям в регионарных лимфатических узлах и уменьшению числа малых лимфоцитов, митотически делящихся клеток, бластов; увеличению дегенерирующих клеток, макрофагальной реакции.

Коррекция циклофосфанового гепатита масляным экстрактом корня лопуха к концу эксперимента приближало клеточные показатели во всех изученных структурно-функциональных зонах регионарных лимфатических узлов печени к уровню контроля. Возрастало количество митотически делящихся клеток, плазмоцитов, значительно снижалось количество макрофагов и дегенерирующих клеток.

Таким образом, энтеральное использование масляного экстракта корня лопуха приводило к количественным и качественным изменениям клеточного состава в регионарных лимфатических узлах печени и практически полному восстановлению их иммунной функции.
Литература

1. Никитин И.Г., Сторожаков Г.И., Буеверов А.О. Лекарственные поражения печени // Болезни печени и желчевыводящих путей. – М.: ООО «М.Вести», 2005. – 332 с.

2. Бородин Ю.И. Лимфатические структуры при токсикозе и сорбентной детоксикации // Материалы V конгресса международной ассоциации морфологов / Морфология.– 2000. – С. 25.

3. Кусаинова Р.Ш., Кузденбаева Р.С., Павелковская Г.П. Фитопрепараты в клинике желудочно-кишечных заболеваний//Фармацевтический бюллетень.-2002.-№11.-С.11-13.

4. Лоскутова Е.Н. Тенденции и структура спроса на препараты из лекарственных растений // Российские аптеки. – 2003. – №3. – С. 12-14.

5. Кузденбаева Р.С. Перспективы применения фитопрепаратов на основе

местного растительного сырья // Мед. журнал Зап. Казахстана. – 2004. – №1.– С. 22.

6. Павелковская Г.П., Токешова Л.Е. Фитотерапия в клинике заболеваний

желудочно-кишечного тракта // Фармация Казахстана. –2006.–№10. –С.36-38.

7. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метацина на

внешнесекреторную функцию печени // Фармакология и токсикология. – 1967.– №3. – С. 334-337.

8. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. – М.: Медицина, 1982. – 304 с.